利用氨基酰化酶的专一性，只水解Ac-L-phe的酰氨键，生成L-phe,而不能水解Ac-D-phe的酰胺。然后根据L-phe和Ac-D-phe在水中的溶解度不同进行分离。而分离出的Ac-D-phe又可经消旋化生成Ac-DL-phe。再一次重复水解、分离。依次类推，可将Ac-DL-phe全部转化为L-phe。固定化氨基酰化酶的制备将DEAE-sephadexa-50放入去离子水中充分浸泡后，再依次用10倍量的0.5mol/LHCl和0.5mol/LNaOH溶液充分搅拌处理30min。然后用去离子水洗至中性，最后分别Chemicalbook用0.1mol/L及0.01mol/L的pH=7.0的磷酸缓冲液处理1-2h,滤干，备用。取经培养40-50h的米麯扩大麯，用其6倍量的支离子水分2次提取，提取液用2mol/L的NaOH溶液调pH至6.7-7.0。然后按100L酶液和1kg湿DEAE-sephadexA-50的比例混合，于0-4℃搅拌吸附4-5h后，过滤取DEAE-sephadexA-50,并分别用去离子水0.1mol/LNaAc溶液、0.01mol/L的pH=7.0的磷酸缓冲液洗涤3-4次。过滤得固定化氨基酰化酶，加1%甲苯放入冷库中贮存备用。